Obrazowanie tkanek metodą spektrometrii mas MALDI-MSI

Klasyczne przygotowanie próbek do badania, polegające na ekstrakcji substancji badanej z materiału biologicznego, zazwyczaj jest długotrwałym i skomplikowanym procesem. Obecnie dąży się do uproszczenia tych procedur, zmniejszając tym samym ingerencję w strukturę i skład próbki. Spektrometria mas z zastosowaniem metody MALDI-MSI oraz drukarka chemiczna ChIP-1000 pozwalają na bezpośrednią analizę in vitro skrawka tkanki pod względem obecności wielu różnorodnych związków naturalnych. W ramach pracy doktorskiej zoptymalizowałem metodykę nakładania matrycy na tkankę, poprzez porównanie różnych metod aplikacji matrycy oraz porównanie krystalizacji poszczególnych matryc, w zależności od stosowanych rozpuszczalników oraz stężeń rozpuszczanej matrycy. W kolejnym etapie, na podstawie danych literaturowych oraz wstępnych eksperymentów, wyznaczyłem metodykę płukania tkanek przed pomiarem. Następnie opracowane parametry nakładania matrycy wykorzystałem w celu zobrazowania dystrybucji peptydów w skrawkach szczurzego mózgu oraz serca. W dalszej kolejności przeprowadziłem analizę peptydów w przysadce szczura z jednoczesnym zbadaniem wykorzystania kurzego żółtka jako medium osłonowe. Udało mi się zidentyfikować liczne peptydy, także te o masie >2000 Da, poprzez fragmentację przeprowadzoną bezpośrednio na tkance. Za pomocą tej metody udało mi się także wskazać różnicę pomiędzy sekwencją β-endorfiny otrzymaną podczas fragmentacji przeprowadzonej bezpośrednio na tkance (alanina w pozycji 26), a sekwencję dostępną w bazach danych i sprzedawaną jako standard analityczny (walina w pozycji 26).